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肝脏受损,没有一口酒是无辜的
人阅读 发布时间:2023-01-10 11:58
肝脏受损,没有一口酒是无辜的
酒精性肝病 (Alcoholic liver disease, ALD),也称为酒精相关性肝病 (alcohol-related liver disease, ARLD),这个名词包括因为过度饮酒所导致的肝病,如脂肪肝、酒精性肝炎、以及伴随肝脏纤维化或肝硬化而存在的慢性肝炎。可以说酒精性肝病是发生肝病的主要原因。研究表明脂肪肝会发生在任何长期大量饮酒的人身上,这个过程是短暂的,而且是可逆转的。重度饮酒者有超过90%会发展成为脂肪肝,大约有25%会发展为更严重的酒精性肝炎,15%会最终变成肝硬化。全世界每年因此的死亡人数估计为150,000人[1]。目前对于酒精性肝病的研究仍然聚焦于两点
- 酒精性肝病的成因:目前对于酒精性肝病患病的机制尚不完全清楚。80%的酒精会透过肝脏完成解毒。长期饮酒导致促炎细胞因子(tnf - α、白细胞介素6和白细胞介素8)分泌、氧化应激、脂质过氧化和毒性。这些因素导致肝细胞的炎性反应、凋亡和最终的纤维化。对于为何这种情况只发生在少数人的身上,原因尚不清楚[2]。
- 除酒精外其他因素对酒精性肝病的影响:国内外许多研究者都对此问题进行了许多研究,得出了相当多得结论如:木犀草素能够缓解小鼠慢性和过量乙醇喂养引起的酒精性肝病、口服植物乳杆菌SN13T细胞对小鼠酒精中毒症状的改善、以及肝星状细胞激活通道Igfbp3和SerpinA12促进酒精诱导的脂肪性肝炎。
肝星状细胞激活通道Igfbp3和SerpinA12促进酒精诱导的脂肪性肝炎[3]
可以说酒精性肝病的研究是现如今大热的话题,对于感兴趣的研究者来说建立一个合适的酒精性肝病模型是至关重要的。就让我们看看建立酒精性肝病的模型有哪些方法吧。
小鼠品系选择
在造模之前需要选择合适的小鼠品系。研究表明C57BL/6小鼠通常是该模型的最优选择。其他种系小鼠可能需要长时间适应含乙醇的饲料,才能确保足够的乙醇量,或者可能无法适应乙醇饲料,在研究结束前死亡率很高。建议使用8-10周龄或更大的雄性小鼠,体重至少22克。更年轻或更轻的老鼠可能有更高的死亡率[4]。
酒精性肝病建模方法
长期饮酒是世界范围内慢性肝病的主要原因,导致肝硬化和肝细胞癌。小派在这里列举两种常用模型仅供老师们参考。
- 慢性酒精性损伤小鼠模型(NIAAA):先进行酒精液体饲料喂养(4~6周居多),后续进行单次或多次酒精灌胃。这种慢性加单次灌胃乙醇喂养方案协同诱导肝损伤、炎症和脂肪肝,模拟患者急性-慢性酒精性肝损伤。这种喂养方案也可以扩展到长期喂养,最长可达12周。因此,这个简单的模型对于酒精性肝病(ALD)和其他因酒精而受损的器官的研究非常有用。
- 急性酒精性肝损伤模型:小鼠进行乙醇灌胃3次即可获得该模型。 表1:Mouse models used for the study of alcoholic liver injury[4].
实验中小鼠的检测指标
- 体重变化
(a) C57BL/61雌性小鼠(n= 17)在喂食酒精饲料加单次酒精灌胃过程中体重的演变。(b)在喂养第一天(初始)、5 d习服期结束后和灌胃前11天(最终)测量配对喂养(n=7)和乙醇喂养(n= 34)的C57BL 6雌性小鼠的体重。
- 乙醇喂养后肝脏CYP2EI的表达和血浆乙醇水平。
- 10天对照组喂养和乙醇喂养小鼠(不灌胃)肝组织中CYP2El的代表性免疫染色。(b)小鼠给予10 d乙醇饲料喂养。第11天清晨采血,测定血浆乙醇浓度(灌胃后0h)。随后给予5 g /kg乙醇灌胃,分别于灌胃后1和2 h测定小鼠血浆乙醇浓度。 3. 通过检测血清ALT和AST水平评估肝损伤。
C57BL/6小鼠分为3组:正常喂食酒精饲料4周、喂养酒精饲料4 ~ 6周+多次灌胃(4 ~ 6周期间每周2次)、喂食酒精饲料10 d +单次灌胃。图中括号内的数字表示每组小鼠的数量。
接下来小派为大家介绍Research diet企下的酒精饲料L10016以及对照饲料L0015。
132.2g L10016A+ 50g 无水乙醇+817.82g H20= 1000g L10016
132.2g L10016A + 89.6g 麦芽糊精+778.82g H20= 1000g L10015
需要注意的是,*L10015为L10016的对照词料。购买时均为L10016A,通过上述配置方法获得不同的饲料。
假设蛋白质,碳水化合物,脂肪,纤维,甲醇的生理代谢热值分别为4,4,9,0和7.2kcal/gm.
在此基础上,L10015和L10016的热量均约为1000kcal/kg
美国Research Diets公司是一家专业生产实验室动物饲料的大型公司,1984年以来一直致力于研究特定饲料成分对实验动物表型表达的影响,包括诱导动物肥胖、糖尿病、癌症、骨质疏松、动脉硬化、毒理学、代谢综合症、高血压等各个研究方向的特定饲料。
派克生物是美国Research Diets公司在中国地区独代,为国内各科研院校提供大小鼠用诱导动物肥胖、糖尿病、癌症、骨质疏松、动脉硬化、毒理学、代谢综合症、高血压等各个研究方向的特定饲料。
- Basra,Sarpreet.Definition, epidemiology and magnitude of alcoholic hepatitis. World Journal of Hepatology. 2011, 3(5): 108–113. PMC 3124876 . PMID 21731902. doi:10.4254/wjh.v3.i5.108.
- Longstreth, George F.Zieve, David . Alcoholic Liver Disease. MedLinePlus: Trusted Health Information for You. Bethesda, MD: US National Library of Medicine & National Institutes of Health. 18 October 2009 .
- Juan p.Arab,Daniel Cabrera,Tejasav Sehrawat, Nidhi Jalan Sakrikar, Hepatic stellate cell activation promotes alcohol-induced steatohepatitis through lgfbp3 and serpinA12
- Bertola, A., Mathews, S., Ki, S. et al. Mouse model of chronic and binge ethanol feeding (the NIAAA model). Nat Protoc 8, 627–637 (2013). https://doi.org/10.1038/nprot.2013.032